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【资讯】国兰茎顶组织培养技术田葱

发布时间:2020-10-18 16:48:36 阅读: 来源:软门帘厂家

国兰茎顶组织培养技术

中国兰新芽生长期正值南方高温高湿的多雨季节,杂菌繁衍猖獗,土壤、介质中带菌尤为严重。供接种取样的兰盆介质应尽少带杂菌,不施有机肥,放置在透光避雨处,当新芽初露时即让幼芽裸器上面。取6~13cm长的新芽,从植株基部切高,用刮刀除去根、赃物和外包叶2~3片,充分洗净后将材料再切取2~3cm长,在10%次氯酸的药液中消毒10分钟。如带菌严重,应用0.I1%升汞和饱和漂白粉上清波交叉消毒。灭菌后用无菌水冲洗数次,再放到灭菌滤纸上吸干水许,然后在解剖镜下无菌操作利取茎尖和腋芽。如果以去病毒为目的,所剥取的茎尖应在O.2mm以下,否则可剥取2mm以上茎类,带2个叶原基,有利于成活。

(一)、原球茎的诱导

兰花各个部分的离体组织部能诱导形成原球茎,再经分化培养形成植株。一旦形成原球茎后,就能不断分割继队培养增殖起来,也就是建立了无性繁殖系。兰花的原球茎生命力强,遗传性状稳定,对快速繁殖及种质资源保存极为有利。

外植体接种后放置在23一25度的黑暗条件下培养,1~2十月后可分比出1至数个乳白色的原球茎,在解剖镜下观察类似桑果形状的园球突起,以后转绿,再经培养易呈根状茎(或呈树枝状的丛生形),。影响兰花原球茎诱导成功的因素有:

1、品种的影响:不同品种由于遗传类型、内源激素和多酚类物质含量等囚素的差异,诱导启动的难度也不尽相同。

2、培养基的影响:各品种对不同培养基的适应程度不一样。春兰类品种以White+BA;+NAA5+CM8.5%和B11+BA+NAA2为好。“夏蕙”、“秋素”等则以MS+BA0.5+NAA1十活性炭0.5%的培养基为好。初步观察,春兰品种适应以无机盐浓度和氨态氮含量低,而生长素含量高的培养基。“夏蕙”、“秋素”等品种则适应无机盐浓度较高、生长素含量较低的培养基。

3、新芽氏度及材料类别的影响:茎尖无论启动率和成功率均高于测芽以9~13公分的新芽诱导,成功率最高。

4、诱导启动后褐变死亡的影响:国兰品种的茎顶接种后成活并膨大呈桑果状原球茎因为启动,成功率尚好,但启动后容易褐变死亡,是国兰组培失败的原因之一。据四川农科院生物技术研究所的资料,褐变死亡数几乎占3/4。由于国兰芽端具有较多的多酚氧化酶,经茎项培养易褐化而死亡,如采用较大的外植体接种,降低培养温度、暗培养、尽量减少伤口面以及在培养基中附加褐变抑制剂(常用抗氧化剂,如芸香苷,柠檬酸等),或配合应用活性炭等,有减轻褐变死亡的效果。

(二)、兰科植物多通过原球茎途径分化形成植株。热带兰原球茎多呈园球状,国兰的原球茎则呈丛生状(根状茎)。原球茎形成阶段是兰花大量繁殖的有利阶段,是快速繁殖,提高增殖率的重要环节。茎尖,侧芽接种3~6个月后,根状茎形成时即可分割继代,增殖培养基以W和B11为基本培养基,附加NAA1~2的液体培养基为宜。放置在漫转速转床上加光培养(1~2转/分),每隔15天更换一次培养基,连续继代3~4次后,又转入相同成分,附加有活性炭(0.3%)和柠檬酸(500mg/1)的固体培养基,每月继代一次。液培、固培交替进行。增殖培养中,原球茎的分割不可太小;培养群体不宜太少;培养液则不可过多;继代培养时间不可太长,否则原球茎生长不良,甚至死亡。原球茎可以不断地再分割、增殖,这样就建立了无性系。国兰原球茎的继件次数和时间还有待探索,但从已继代3~5年的原球茎来看,仍保持正常的增殖和分比能力。标签:技术

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